新品推介 | 超快甲基化转化试剂盒,10min转化率超99.9%
- Classification:新闻动态
- 作者:
- Source:
- Release time:2024-11-01
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新品推介 | 超快甲基化转化试剂盒,10min转化率超99.9%
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体内DNA甲基化与癌症的发生和发展有着密切的联系。
DNA甲基化是一种表观遗传学机制,在DNA甲基转移酶的作用下,将甲基基团(-CH3)共价地添加到DNA分子的特定碱基上,从而影响基因表达、基因组稳定性、细胞分化和发育等生物学过程。DNA甲基化主要发生在CpG位点上,即DNA序列中的胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)序列中的胞嘧啶上。
这种机制在正常细胞分裂和发育中起重要作用,然而,在癌症形成过程中,DNA甲基化的异常可以导致关键基因的功能失调,导致基因沉默或基因组不稳定,促进肿瘤生长。因此,癌症相关基因的异常甲基化可以用作早期检测和风险评估的标志物。
图1. DNA异常甲基化与癌症的相关性
• 亚硫酸盐转化(bisulfite conversion)是目前用于检测DNA甲基化状态的标准方法之一。其原理是通过亚硫酸氢盐处理DNA样本,使得未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则保持不变。因此,可以通过设计甲基化特异性探针来区分特定DNA靶标位点上碱基的差异:如果目标区域发生DNA甲基化,则探针能与模板进行互补配对,释放荧光信号;如果未发生甲基化,则无信号。
可以说,甲基化检测准确与否,甲基化转化是关键步骤之一,但在实际操作中存在相当多的难点和挑战:
• 转化效率不高:如果只有一部分胞嘧啶会被转化成尿嘧啶,会直接导致检测结果不准确。
• DNA降解:如果转化条件不当,过程中DNA极易降解,影响到后续的实验步骤,如PCR或测序。
• 试剂组分污染:转化中残留组分可能会污染样品,影响到后续的实验结果。
图2. 甲基化转化可区分目标区域甲基化情况
• 经过大量优化验证实验,唯善生物隆重推出超快甲基化转化试剂盒,采用独特的配方和工艺流程,仅需10分钟即可完成甲基化转化,转化率高达99.9%,同时能够有效保护DNA样本,精准助力更快速、更准确、更稳定的DNA甲基化分析。
图3. 唯善生物超快甲基化转化试剂盒特点
试剂盒采用亚硫酸盐转化液对核酸中未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,完成亚硫酸氢盐转化修饰、提取、富集、纯化步骤。其处理后的产物用于甲基化检测。
32测试/盒(磁珠法),20测试/盒(纯化柱法)
磁珠常温运输,长期保存建议置于 2℃-8℃,其余试剂置于室温保存(注意避免阳光直射),有效期为 12 个月。详见说明书。
纯化后的DNA样本,浓度区间为500pg - 2μg。
不同长度HBB片段经3种转化方法处理(M1-M3均为98℃转化10min),结果显示转化效率高,PCR样本浓度均为500ng基因组DNA。
图4. 不同长度片段转化胶图
PCR检测结果显示98℃转化10min即可达到高转化率,经计算转化效率均>99.9%。
图5. 超快甲基化转化PCR检测结果
对比原始方法(M0:80℃下转化45min),超快转化Ct值与其一致,且重复性好,证实了该试剂盒快速稳定的性能,可满足下游检测。
图6. 超快转化与原始方法对比
请严格按照说明书设置转化条件,转化时间过长或过短均可能影响转化结果。其他事项详见说明书。
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